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实验室规则

实验记录及实验报告

生物化学实验

实验一　缓冲液配制和pH值测定

实验二　分光光度计线性分辨范围测定

实验三　3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量

实验四　RNA的提取与核酸的颜色反应

实验五　影响淀粉酶活性的一些因素

实验六　硫酸铵沉降法纯化工业淀粉酶

实验七　葡聚糖凝胶色谱法脱盐

实验八　淀粉酶活力的测定

实验九　Folin-酚比色法测定蛋白质含量

实验十　间隔法测定过氧化物酶的活力

实验十一　连续记录法测定过氧化氢酶的活力

实验十二　2,6-二氯酚靛酚滴定法测定L-抗坏血酸的含量

实验十三　荧光光度法测定核黄素的含量

实验十四　茚三酮比色法测定赖氨酸含量

实验十五　考马斯亮蓝G-250比色法测定蛋白质含量

实验十六　纸电泳分离鉴定三种腺苷酸

实验十七　醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白

实验十八　NBT光化还原法测定超氧化物歧化酶活性

实验十九　Eadie-Hofstee法测定辣根过氧化物酶的Km

实验二十　硫酸铵分级沉淀纯化苯丙氨酸解氨酶

实验二十一　凝胶色谱法脱去PAL溶液中的硫酸铵

实验二十二　DEAE纤维素柱色谱法纯化PAL

实验二十三　超氧化物歧化酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳

实验二十四　过氧化物酶同工酶的分析——等电聚焦电泳

实验二十五　过氧化氢酶和辣根过氧化物酶的色谱分离与电泳

实验二十六　1, 5-二磷酸核酮糖羧化酶加氧酶提取及其Western杂交检测

分子生物学实验

实验二十七　用16S rDNA方法鉴定细菌种属

实验二十八　植物基因组DNA的提取、纯化与定量

实验二十九　DNA琼脂糖凝胶电泳

实验三十　基因组DNA的酶切与检测

实验三十一　质粒DNA的提取、纯化与鉴定

实验三十二　目的基因PCR扩增

实验三十三　感受态细胞的制备及转化

实验三十四　DNA测序

实验三十五　重组子的构建、筛选与鉴定

实验三十六　植物总RNA的提取、纯化与检测

自行设计实验

实验三十七　工业淀粉酶的纯化与分析

综合性开放实验

附录

附录一　植物样品的采取、处理与保存

附录二　常用缓冲溶液的配制

附录三　硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）

附录四　色谱显色剂

附录五　常用凝胶及色谱用滤纸的规格和性能

附录六　玻璃仪器的洗涤及一些常用洗涤剂

附录七　移液器的使用

附录八　分光光度计

附录九　离心机

附录十　电泳设备

附录十一　pH计

附录十二　电子天平

附录十三　EDC-810型PCR仪

附录十四　实验室安全及防护知识

生物化学实验习题

生物化学实验习题参考答案

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前言

　　前言

　　生物化学实验是生命科学研究的重要手段。学生通过生物化学实验课程的学习，可加深对实验原理的理解、巩固理论知识、掌握生物化学实验的技术、熟悉实验室常用仪器和一些大型精密仪器的使用，从而为以后的专业课学习以及生产、科研工作打下一个良好的基础。

　　《生物化学与分子生物学实验技术》（第三版）是在前两版教材的基础上，进一步结合我校生物学教学实验中心资深教师的实践教学经验，对原教材做了大量修正编写而成的。本版教材更加注重培养学生在定量、定性实验操作中的科学性、严谨性。通过本课程的学习，可以培养学生分析问题、解决问题的能力，激发学生对科学实验的兴趣。

　　为了使学生通过有限的实验课程学到更多的实验技能，在将来的工作或科研中少走弯路，编者将几十年实验教学的经验和体会融入了本教材。本书会让学生对实验过程中的每一步骤怎样操作、为什么这样操作，有一个较为清晰的理解。本书对学生以及科研工作者都是一本有益的工具书。

　　本教材内容包括蛋白质、糖类、脂类、核酸、氨基酸、酶和维生素的提取、分离、电泳、色谱、光谱法检测及分子杂交等定性定量技术。本教材的每个实验后面都附有思考题及答案，便于学生和研究人员在学习和科研中参考。本书可供理工科高等院校的生命科学、生物技术、生物工程及农林院校的农学、林学、植保、资源环境、园艺、食品、理学等各专业的本科生使用，可以作为“生物化学实验”、“分子生物学实验”等课程的教材和参考书。

　　本教材的出版得到了南京农业大学的苏业瑜、叶茂炳、徐朗莱等教授以及生命科学院领导、实验教学中心领导的大力支持和帮助；生物基地51班的张亮、齐继艳、陈舟舟和生命基地62班的张艳红同学以及生物基地91班的牟尚婕、牛静、龙若吟、朱非凡等同学对部分实验内容进行了探究、改进与验证，谨此深表谢意！

　　鉴于作者水平有限，书中不足之处，欢迎广大师生提出宝贵意见。

　　编者

　　南京农业大学

　　第二版前言

　　生物化学与分子生物学实验技术是生物化学的重要内容，也是生物科学研究的重要方法和手段。学生通过生物化学与分子生物学实验，理解实验原理，进一步巩固生物化学与分子生物学的理论知识，并且掌握生物化学与分子生物学实验的基本方法和技术，熟悉实验室常用仪器和一些大型精密仪器的使用，从而为以后的专业课学习以及生产、科研工作打下一个良好的基础。

　　《生物化学与分子生物学实验》一书是在第一版《生物化学实验》的基础上，结合本校多年的实验教学经验和广大师生的建议，对原教材做了必要的修改。增添了一些新的实验内容、习题及答案。在附录中整理和翻译了“常用仪器性能指标及使用说明”、“缓冲溶液的配制”、“植物样品的采集、处理及保存”等资料。本教材包括蛋白类、糖类、脂类、核酸、氨基酸、酶和维生素的提取、分离、电泳、层析、光谱法检测及分子杂交等定性定量技术，以锻炼学生的基本实验技能，同时培养学生综合实验、设计实验的创新能力。

　　本书可供理工科高等院校的生物科学、生物技术、生物工程及农林院校的农学、林学、植保、资环、园艺、食品、理学等各专业的本科生使用。可以作为《生物化学实验》、《生物化学分析》、《分子生物学实验》等课程的教材和参考书。

　　本教材多年来得到了南京农业大学的苏业瑜、叶茂炳、徐朗莱等教授以及生命科学院院领导、实验教学中心领导的大力支持和帮助；还有生物基地51班的张亮、齐继艳、陈舟舟和生命基地62班的张艳红同学的积极参与，谨此深表谢意！欢迎广大师生提出宝贵意见。

　　编者

　　2010年5月

　　南京农业大学

　　第一版前言

　　生物化学实验技术不仅是生物化学的重要内容和理论基础，也是生物科学研究的重要方法和手段。学生通过生物化学实验，不仅可以进一步巩固生物化学的基本理论，了解实验原理，还能熟悉生物化学实验的基本方法和技术以及许多大型精密仪器的使用，从而为以后的专业课学习以及生产、科研工作打下良好基础。

　　《生物化学实验》供理工科高等院校的生命科学、生物技术、生物工程及农林院校的农学、林学、植保、资环、园艺、食品、理学等各专业的本科生使用，要求学生学会蛋白类、糖类、脂类、核酸、氨基酸、酶和维生素的分离提取、定量测定或定性鉴定等方法；掌握电泳、层析、离心和光谱法检测等技术；培养学生综合性、设计性实验创新能力。

　　本书在南京农业大学生命科学院编写的《生物化学实验指导》讲义基础上，又吸取了该校多年的教学、科研、开发工作中的经验和广大学生的建议，对原教材内容进行了必要的修改，重新编写了这本《生物化学实验》教材，并补充了许多新的实验内容，便于学生自学。我们还增设了“自行设计实验”、“综合性选做实验”和“综合性开放实验”，鼓励和培养学生自己动手、开发创新的精神。在附录中，我们还整理和翻译了有关“常用仪器性能指标及使用说明”、“缓冲溶液的配制”、“植物样品的采集、处理及保存”等内容，为从事综合性生物化学实验的师生们提供方便。

　　本教材多年来得到了苏业瑜、叶茂炳、周培根、徐朗莱、戚晓玉各位教授和欧瑜等老师以及生命科学院领导、实验教学中心领导的大力支持和帮助；还有生物基地51班的张亮、齐继艳、陈舟舟和王潇同学的积极参与，谨此深表谢意！鉴于作者水平有限，欢迎广大师生提出宝贵意见。

　　编者

　　2007年3月