流式细胞术操作规程(第二版) 下载 pdf 百度网盘 epub 免费 2025 电子书 mobi 在线

本书是国际上针对流式细胞术操作的权威著作，是应用流式细胞术进行科研和临床诊断数十年经验的总结。本书分为24章，详细阐述了流式细胞术每一项操作的材料、用品、方法、注意事项，并配有插图近200幅，图文并茂，内容实用，适于应用相关技术的科研和临床人员阅读参考。

第1章  流式细胞术介绍

　1  概述

　2  细胞（或粒子或事件）

　3  激发光

　4  应用流体学：细胞通过激光束

　5  细胞信号

　6  从信号到数据

　7  从数据到报告

　8  分选

　9  结论

第2章  细菌的多参数流式细胞分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第3章  白细胞的多参数数据的采集和分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第4章  激酶信号级联放大的流式细胞分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第5章  细胞因子的流式细胞术分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第6章  利用细胞示踪染料检测抗原特异性T细胞前体增殖的频数

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第7章  采用流式细胞术评估淋巴细胞介导的细胞毒作用

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第8章  采用流式和影像细胞术多参数分析细胞调亡

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第9章  通过边缘群细胞表型检测和富集造血干细胞

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第10章  Hoechst 33342和Rhodamine123染色分析造血干细胞特征

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第11章  外周造血池动员的CD34NEG造血前体细胞表型和功能分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第12章  荧光报告蛋白的多参数流式细胞术

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第13章  荧光蛋白表达细胞的流式细胞术分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第14章  联合应用流式细胞术和基因芯片方法检测转录谱

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第15章  荧光共振能量转移的流式细胞分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第16章  以荧光激活细胞分选技术为基础的哺乳动物蛋白-蛋白相互作用陷阱系统的建立

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第17章  流式细胞术筛查酵母菌表面展示文库

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第18章  基于荧光共振能量转移的HIV-1病毒的融合分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第19章  非同步化细胞群体的细胞周期分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第20章  实体瘤DNA含量分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第21章  DNA和RNA的同步流式分析

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释第22章  荧光原位杂交和流式细胞术测定端粒长度

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第23章  小型激光器在流式细胞仪上的应用

　1  概述

　2  材料

　3  方法

　4  注释

第24章  通过BSL-3实验室分选活的、传染性细胞

　1  引言（见注释4.1）

　2  材料

　3  方法

　4  注释

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编辑推荐

适于应用相关技术的科研和临床人员阅读参考。

前言

自20世纪40年代以来，流式细胞术已经发展成为一门涉及激光技术、流体动力学、电子学、光学、计算机科学、物理学、化学、生物学和数学多学科交融的科学技术。近年来，仪器的革新，小型低能量的激光器的发展，新的荧光素和荧光蛋白的发现，以及新的方法学的应用都对高速发展的流式细胞术的应用起了很大的促进作用。在流式细胞术操作规程完全修订和反映最新成果技术的第2版中，领衔的科学研究者们将那些已被时间证明的、前沿的关键性技术准确无误地展示给我们。编者期望最新权威性的流式技术方法汇集的本书不仅能够成为经验丰富流式细胞仪使用者的有价值的参考手册，而且也能对生物学和生物医学科学领域的新手们起到有效的指导作用。在流式细胞仪介绍一章中，作者从流式细胞术历史开始到对该技术将来的展望结束，为我们概括地描述了流式细胞术全貌和各种不同的应用。第2至22章包括了实用性很强的详细的操作程序和最新的技术。实验设计的详细介绍，实用的设计技巧，试剂和数据分析工具的选择使得研究者不仅能够将流式技术应用于传统的表型特征分析，而且完全能应用于新出现的基因组学和蛋白组学的研究。为了使操作规程更加完善，作为补充，本书在第23和24章中前瞻性地介绍了应用未来一代的固体激光在高速分选中防止感染性气溶胶形成的快速方法。在本书中介绍了一种最新的基于颜色的细胞设门策略，该策略使复杂的多参数资料的分析变得更加简单明了。流式细胞仪复杂的多参数描述最好地证明了在以功能为基础的分子机制的研究可以在单细胞水平进行。这是采用高度特异性抗体，通过鉴别磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白来测定细胞内激酶信号级联反应的完美展示；结合免疫表型分型，可以解释在异质性群体中个体细胞独立的生物化学信号事件。其他的操作规程是有关T细胞亚群特征分析的如：细胞内细胞因子染色可以应用于对罕见的抗原特异性T细胞的定量；四聚体细胞示踪染料可以和细胞因子染色技术相结合，确定抗原特异性细胞前体细胞的增殖频数；抗原特异性细胞毒性T细胞的细胞溶解功能，也可以通过采用非核素标记的方法，测定包括不同谱系来源的原代细胞在内的靶细胞内的半胱天冬酶的活化。同时，也阐述了分析凋亡的多种方法，如同时分析半胱天冬酶活化、annexin V结合膜磷脂酰丝氨酸残基以及DNA染料穿膜对DNA染色等方法。我们在本书中向试图涉猎干细胞领域的研究者推荐一些检测干细胞备选的方法。有两种方法可以检测造血干细胞向胞外释放活细胞染料Hoechst 33342和罗丹明123的能力。由于这些方法避免了确认细胞表面抗原，因此，被广泛地应用于缺乏确定的细胞表面抗原的其他类型的干细胞。第三种方法可以用来研究人造血干细胞表面CD34抗原的生物学作用。原代细胞如造血干细胞十分容易转导外源性基因，因而便于进行细胞研究。来源于水母的绿色荧光蛋白（GFP）和来源于珊瑚虫的GFP的类似物是这类研究常用的标记物。与其他的生物发光标记物不同的是，GFP和GFP相关蛋白发生荧光时不需要外源性底物或者协同因子。此外，本书还介绍了一些同时检测多种荧光蛋白质的方法。采用荧光激活细胞分选仪（FACS）分离细胞是一种非常有效的分离技术。FACS采用微阵列技术将有助于加速对复杂组织和器官中不同类别细胞基因表达的分析。对于这些技术的最新进展，我们在微阵列和杂交技术一章节中做详细的讨论，当然，其中也包括一些检测活细胞内生物分子间相互作用的创新性方法。荧光共振能量转移（FRET）技术是利用GFP的二种光谱变量来确定蛋白质相关的分子。将相关的蛋白与GFP构成融合蛋白，使以前因抗体限制而不能采用FRET检测的蛋白也能采用FRET检测，同时发明了两种利用FACS高通量特点研究新蛋白间相互作用的方法。第一个方法是哺乳动物的蛋白质-蛋白质交互作用圈套（MAPPIT）技术，这是用来筛选复杂cDNA文库中新蛋白间相互作用的一种双杂交检测方法；第二个方法是采用流式细胞术快速从酵母菌表面展示文库分离特异性抗原克隆。通过展示酵母菌表面的单链抗体（scFv），不需要通过亚克隆、表达和scFv纯化即可进行克隆的亲和力筛选，且可以通过FACS快速分选出亲和力最高的克隆。在其他的章节中，从事基础和临床的科研工作者会看到一些用于细胞周期非同步群体分析，确定DNA倍体、RNA含量和肿瘤细胞增殖状态的方法。书中还介绍了以FRET为基础的测定HIV-1病毒颗粒与初始T细胞融合的方法，这是一种原位的流式细胞染色体杂交检测技术（flow-FISH），可用于检测细胞老化和恶性化过程中端粒长度的改变，是较复杂的末端限制性片段Southern杂交方法的改良方法。这种方法还适合于研究其他病毒胞膜蛋白介导的病毒与细胞的融合。对于有兴趣研究微生物的科研工作者，本书介绍了用于微生物研究的敏感的流式细胞改良检测技术和微生物特异性检测方法学的进展。在细菌多参数流式细胞术分析一章中，介绍了采用流式细胞术检测生理状态下革兰阳性和革兰阴性菌的可靠方法。实现了期待已久的多参数微生物的分析。我们非常感谢John Walker邀请我们参与这项令人兴奋的工作，同时十分感谢他提供了专业的编辑帮助。感谢所有编者的真情投入，他们自愿分享各自最新研究结果的合作精神感染着整个流式细胞术学术界。